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梯度基因擴(kuò)增儀(HN-SP96G)工作原理

更新時(shí)間:2024-05-20瀏覽:896次

梯度基因擴(kuò)增儀(HN-SP96G)擴(kuò)增儀的工作原理:

梯度基因擴(kuò)增儀(HN-SP96G)的工作原理主要基于聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)技術(shù),通過循環(huán)變性-退火-延伸三個(gè)基本步驟,實(shí)現(xiàn)DNA片段的體外擴(kuò)增。具體過程如下:


  1. 變性:DNA雙鏈在93℃左右的高溫下解離成單鏈,以便與引物結(jié)合。

  2. 退火:溫度降至55℃左右時(shí),引物與DNA單鏈的互補(bǔ)序列配對(duì)結(jié)合。

  3. 延伸:在TaqDNA聚合酶的作用下,以dNTP為反應(yīng)原料,靶序列為模板,按堿基配對(duì)與半保留復(fù)制原理,合成一條新的與模板DNA鏈互補(bǔ)的半保留復(fù)制鏈。

通過不斷循環(huán)這三個(gè)步驟(通常每完成一輪循環(huán)需2~4分鐘),可以獲得大量的DNA擴(kuò)增產(chǎn)物。理論上,經(jīng)過25~30輪循環(huán)后,基因可擴(kuò)增10^9倍以上,實(shí)際上一般可達(dá)10^6~10^7倍。


基因測(cè)序儀的工作原理:

測(cè)序儀的工作原理主要基于特定的測(cè)序技術(shù),如Sanger雙脫氧鏈末端終止法。以下是其工作原理的簡要概述:

  1. DNA片段制備:首先,需要將要測(cè)序的DNA片段進(jìn)行特定的處理和準(zhǔn)備。

  2. 測(cè)序反應(yīng):在測(cè)序反應(yīng)中,利用特定的測(cè)序引物和DNA聚合酶,同時(shí)加入四種脫氧核苷酸(dATP、dTTP、dCTP、dGTP)和一種雙脫氧核苷酸(ddNTP)。雙脫氧核苷酸在合成中會(huì)隨機(jī)終止DNA鏈的延伸,形成不同長度的DNA片段。

  3. 電泳分離:通過變性聚丙烯酰胺凝膠電泳對(duì)這些不同長度的DNA片段進(jìn)行分離。

  4. 檢測(cè)和讀數(shù):最后,通過特定的檢測(cè)設(shè)備(如激光掃描儀)檢測(cè)分離后的DNA片段,并根據(jù)片段的長度和順序,讀出DNA的序列。


需要注意的是,隨著技術(shù)的進(jìn)步,目前已經(jīng)有更高效的測(cè)序技術(shù),如高通量測(cè)序技術(shù)(也稱為下一代測(cè)序技術(shù)),其工作原理可能有所不同,但基本原理仍然是通過檢測(cè)DNA片段的序列來確定整個(gè)DNA分子的序列。

總的來說,擴(kuò)增儀和測(cè)序儀都是生物實(shí)驗(yàn)室中重要的工具,它們?cè)诜肿由飳W(xué)、醫(yī)學(xué)診斷、法醫(yī)學(xué)鑒定、農(nóng)業(yè)生物技術(shù)等領(lǐng)域有著廣泛的應(yīng)用。

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